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FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 產(chǎn)品貨號(hào):
    BN16012
  • 中文名稱:
    FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 英文名稱:
    FITC-Annexin V and PI Apoptosis Kit
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號(hào)

    產(chǎn)品規(guī)格

    售價(jià)

    備注

  • BN16012-50T

    50T

    ¥740.00

  • BN16012-100T

    100T

    ¥1250.00

產(chǎn)品描述

產(chǎn)品規(guī)格:50T,100T

產(chǎn)品內(nèi)容:

image.png

儲(chǔ)存條件:4℃避光冷藏,請(qǐng)勿凍存。有效期見(jiàn)外包裝。

光譜特性 

     FITC-Annexin V: Abs/Em = 494/518 nm

     PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)

產(chǎn)品介紹 

     FITC-Annexin V 和 PI 凋亡試劑盒提供了一種快速簡(jiǎn)便的方法,通過(guò)標(biāo)記早期凋亡細(xì)胞(綠色)和壞死細(xì)胞(紅色),用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平。產(chǎn)品可以使用流式細(xì)胞儀或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。

     FITC-Annexin V 可以標(biāo)記凋亡細(xì)胞。Annexin V 選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡(jiǎn)稱 PS)。在細(xì)胞發(fā)生早期凋亡時(shí),PS 會(huì)外翻到細(xì)胞表面,即細(xì)胞膜外側(cè)。用綠色熒光探針 FITC 標(biāo)記的 Annexin V,即 FITC-Annexin V,可以結(jié)合外翻的磷酯酰絲氨酸,從而檢測(cè)細(xì)胞凋亡的重要特征。 

     碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種 DNA 結(jié)合染料,它可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞的細(xì)胞核。PI 可以由 488,532 或 546 nm 的激光激發(fā),呈現(xiàn)紅色熒光。

使用方法 

     下列實(shí)驗(yàn)方案以利用星形孢菌素誘導(dǎo) Jurkat 細(xì)胞凋亡為例,如果使用其他誘導(dǎo)劑和其他類型的細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)條件需要略作調(diào)整。

一、流式細(xì)胞檢測(cè) 

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測(cè)樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,作為陰性對(duì)照。此外,設(shè)定一組樣品做單染, 用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。 

2. 收集細(xì)胞。懸浮細(xì)胞:300 g,4℃離心 5 min 收集細(xì)胞;貼壁細(xì)胞:用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g,4℃離心 5 min收集細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以防引起假陽(yáng)性。

     注:用胰蛋白酶消化然后使細(xì)胞在最佳細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng) 基中恢復(fù)約30分鐘,然后再染色。 胰蛋白酶消化會(huì)暫時(shí)破 壞質(zhì)膜,允許Annexin V結(jié)合磷脂酰絲氨酸在細(xì)胞膜的細(xì)胞 質(zhì)表面上,從而導(dǎo)致假陽(yáng)性染色。

3. 用預(yù)冷的PBS 洗滌細(xì)胞兩次,每次均在 300 g,4℃下離 心 5 min,收集 1-5×105 個(gè)細(xì)胞并用100 μL 1×結(jié)合緩沖液 重懸細(xì)胞。 

4. 每管加入 4-5 μL 的 FITC-Annexin V 和 5 μL 的 PI工作液。 

     注:我們推薦準(zhǔn)備兩管額外的流式管,每管只加入一種單染染料(FITC-Annexin V 和PI),用于流式單染的補(bǔ)償調(diào)節(jié)。

5. 室溫避光孵育 10-15 min,為避免細(xì)胞凋亡進(jìn)程,孵育過(guò)程可在冰上操作。 

6. 每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結(jié)合緩沖液,盡快通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。FITC-Annexin V 可以由 488nm 激光激發(fā),檢測(cè)熒光發(fā)射光譜約在 530 nm 處(FITC 通道),PI 通道發(fā)射光譜約在 617 nm 處(注:PBS 或 1×結(jié)合緩沖液的選擇根據(jù)不同凋亡處理以及不同細(xì)胞具體選擇)。

二、熒光顯微鏡檢測(cè)

     對(duì)于懸浮細(xì)胞,可參照流式細(xì)胞檢測(cè)的方法進(jìn)行具體操作。 

1. 在蓋玻片或載玻片小室中接種細(xì)胞。 

2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測(cè)樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處 理的細(xì)胞樣品,作為陰性對(duì)照。 

3. 用PBS 洗滌細(xì)胞。 注:細(xì)胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培養(yǎng) 基直接替代Annexin V 結(jié)合緩沖液,但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優(yōu)化。 

4. 每 100 μL 的 Annexin V 結(jié)合緩沖液中加入 5-25 μL的FITC-Annexin V 和 5 μL 的PI。 

     注:最佳使用濃度由具體實(shí)驗(yàn)要求確定。

5. 向培養(yǎng)板中加入足量的染液以覆蓋全部細(xì)胞,室溫避光 孵育 15-30 min。為避免細(xì)胞凋亡進(jìn)程,孵育過(guò)程可在冰上操作,但孵育時(shí)間至少延長(zhǎng)至 30 min。 

6. 用 1×結(jié)合緩沖液清洗細(xì)胞。 

7. 將孵育有細(xì)胞的蓋玻片置于載玻片上,載玻片可提前加一滴 1×結(jié)合緩沖液;對(duì)于培養(yǎng)在小室內(nèi)的細(xì)胞,可直接加 入足量的 1×結(jié)合緩沖液覆蓋細(xì)胞。 

8. 使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞 。FITC-Annexin V 可用 FITC 適用的濾光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。

注意事項(xiàng): 

1. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。