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Annexin V-PE
  • 產(chǎn)品貨號(hào):
    BN16065
  • 中文名稱:
    Annexin V-PE
  • 英文名稱:
    Annexin V-PE
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號(hào)

    產(chǎn)品規(guī)格

    售價(jià)

    備注

  • BN16065-1mL

    1mL

    ¥3536.00

產(chǎn)品描述

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(200T) 

儲(chǔ)存條件:4℃避光冷藏,請(qǐng)勿凍存。本產(chǎn)品在推薦條件下可以儲(chǔ)存 6 個(gè)月。

光譜特性:Annexin V-PE: Ex/Em = 488/578 nm

產(chǎn)品介紹 

細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸( PS )從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。Annexin V 具有易于結(jié)合 到磷脂類如PS 的特性,對(duì)PS 有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。 

Annexin V-PE 可以與7-AAD/PI等聯(lián)合使用,來檢測細(xì) 胞凋亡情況。7-AAD/PI 可被排除在活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞可以同時(shí)被Annexin V-PE 和7-AAD結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽性,從而來區(qū)分活細(xì)胞、早調(diào)細(xì)胞與晚凋細(xì)胞。

使用方法 

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。檢測樣品中應(yīng)包含未經(jīng)處理的細(xì)胞樣品,作為陰性對(duì)照。此外,設(shè)定一組樣品做單染,用于調(diào)節(jié)補(bǔ)償。 

2. 沉淀細(xì)胞 懸浮細(xì)胞:1000 rpm,4 ℃離心 5 min 沉淀細(xì)胞;貼壁細(xì)胞:用不含 EDTA 的胰酶消化細(xì)胞, 1000 rpm ,4 ℃離心 5 min 沉淀細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長,以防引起假陽性。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞無法完全離心至離心管底,可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50 μL 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走 細(xì)胞。

注:用胰蛋白酶消化然后使細(xì)胞在最佳細(xì)胞培養(yǎng)條件和培養(yǎng) 基中恢復(fù)約30分鐘,然后在染色。 胰蛋白酶消化會(huì)暫時(shí)破壞質(zhì)膜,允許Annexin V結(jié)合磷脂酰絲氨酸在細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)表面上,從而導(dǎo)致假陽性染色。

3. 加入約1mL 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。

4. 用適當(dāng)?shù)木彌_液重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度1-5×10^6/mL (緩沖液可選擇終濃度為 2mM Hepes/NaOH, pH7.4,28mM NaCl,0.5mM CaCl2溶液)。 

5. 取100 μL 的細(xì)胞懸液于5mL流式管中,加入5μL Annexin V-PE 混勻后于室溫避光孵育5分鐘。 

6. 加入10μL 20μg/mL的7-AAD或PI,并加400 μL PBS,立刻進(jìn)行流式檢測。

注意事項(xiàng): 

1. 熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。