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DNA 純化回收試劑盒
  • 產(chǎn)品貨號:
    BN12022
  • 中文名稱:
    DNA 純化回收試劑盒
  • 英文名稱:
    Universal DNA Gel / PCR Purification Kit
  • 品牌:
    Biorigin
  • 貨號

    產(chǎn)品規(guī)格

    售價

    備注

  • BN12022-100T

    100T

    ¥350.00

  • BN12022-250T

    250T

    ¥850.00

  • BN12022-50T

    50T

    ¥190.00

產(chǎn)品描述

產(chǎn)品貨號:BN12022 

產(chǎn)品規(guī)格:50T, 100T

應(yīng)用范圍:DNA膠回收,PCR or 酶切產(chǎn)物純化 

產(chǎn)品簡介 

     本試劑盒用于從瓊脂糖凝膠中快速、可靠地回收DNA,從PCR、RFLP、磷酸化、標(biāo)記、連接、雜交及其他酶促反應(yīng)中純化DNA 片段。100bp至20kb的DNA片段可通過Mini Column可純化得到,回收率在50~90%。

產(chǎn)品構(gòu)成

     image.png

要點 

? DNA Wash Buffer:使用前將60 mL 96-100% 乙醇加入至每個 DNA Wash Buffer 瓶內(nèi)。 

? 100 mg 的凝膠相當(dāng)于 100 μL 體積。 

? Buffer GC-A/B:低溫易產(chǎn)生沉淀,使用前請于 37℃水浴加熱至沉淀完全溶解。 

? 65℃預(yù)熱 Elution Buffer 或 ddH2O。 

? 所有操作步驟(包括離心)均在室溫下進(jìn)行。

產(chǎn)品貯存及穩(wěn)定性 

本試劑盒自購買之日起可保存 12 個月。所有試劑及用品可保存于室溫(15-25℃)。

實驗前需準(zhǔn)備的材料 

? 小型臺式離心機(jī)和 1.5 mL 離心管 

? 55~65℃水浴鍋 

? 負(fù)壓裝置 

? 96~100%乙醇 

? 異丙醇(對于 200 bp 以下片段的回收)

操作步驟(離心法) 

     1.瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化:從凝膠上割下帶有目的片段的凝膠到一個 1.5 mL 或 2.0 mL 離心管(稱量估算凝膠的體積,確保加入不少于 1 倍體積的 Buffer GC-A),加入 1 倍體積的 Buffer GC-A,置于 55~60℃水浴 8~10 min,期間顛倒混勻 幾次,直至凝膠完全融化,冷卻離心管至室溫。

PCR 產(chǎn)物純化:加入 2 倍體積的 Buffer GC-B (如 100 μ L 的 PCR 反應(yīng)液,加入 200 μ L Buffer GC-B),混合均勻,瞬時離心,將溶液收集到管底。 

     注:純化 200 bp 以下的 PCR 產(chǎn)物,加入 5 倍體積的 Buffer GC-A/B 到 1 倍體積的 PCR 反應(yīng)液。100 mg 的凝膠相 當(dāng)于 100 μ L。200 bp 以下片段的純化,請加入 1 倍體積的異丙醇。

     2.轉(zhuǎn)移上述混合液(每次不超過 700 μ L)至一個 Mini Column(自帶 2 mL Collection Tube)),12,000 rpm 離心 1 min, 棄濾液,將 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。重復(fù)此步驟至所有樣品通過。

     3.加入 600 μ L DNA Wash Buffer,12,000 rpm 離心 30 s,棄濾液,將 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。

     4.重復(fù)步驟 3。 

     注:確保使用前按要求加入乙醇至 DNA Wash Buffer 瓶內(nèi)。

     5.可選:瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化:加入 600 μ L 無水乙醇,12,000 rpm 離心 30 s,棄濾液,將 Mini Column 放回 2 mL  Collection Tube。 

     注:如果純化的 DNA 產(chǎn)物用于對鹽敏感的應(yīng)用(如測序、平末端連接), 建議采用此步驟。

     6.打開 Mini Column 蓋子,12,000 rpm 離心 2 min,去除殘留的乙醇。

     注:開蓋離心更有利于乙醇的去除。

     7.轉(zhuǎn)移 Mini Column 至一個 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer ( 65 ℃ 預(yù)熱) 或 ddH2O (pH 在7.0~8.5),靜置 1 min,12,000 rpm 離心 1 min 洗脫 DNA。 

     可選:將洗脫下來的液體重新上柱,二次洗脫。 

     注:將 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃預(yù)熱,或加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min 再進(jìn)行洗脫,將會顯著提高 DNA 回收率。

     注:對于 8 kb 以上的片段,加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min。 

     注:第一次洗脫通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脫有利于回收剩下 20%的 DNA。

操作步驟(負(fù)壓/離心法) 

     1. 按照離心法中步驟 1 操作。瞬時離心以收集所有液體至管底。 

     2. 根據(jù)制造商指南安裝負(fù)壓設(shè)備,將 Mini Column 連接到負(fù)壓裝置上。 

     3. 小心轉(zhuǎn)移混合液至 Mini Column 中,打開負(fù)壓裝置,允許液體通過柱子。 

     4. 加入 600 μ L DNA Wash Buffer,打開負(fù)壓裝置 1 min。 

     5. 重復(fù)步驟 4。 

     6. 可選:瓊脂糖凝膠產(chǎn)物純化:加入 600 μ L 無水乙醇,12,000 rpm 離心30 s,棄濾液,將Mini Column 放回2 mL Collection Tube。 

     7. 打開負(fù)壓裝置,干燥空柱子 5 min。 8. 將 Mini Column 轉(zhuǎn)移至一個 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer 或 ddH2O,靜置 1 min,12,000 rpm 離心 1 min 洗脫 DNA。

     注:將 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃預(yù)熱,或加入洗脫液后將 Mini Column 置于 65℃靜置 5 min 再進(jìn)行洗脫,將會顯著提高 DNA 回收率。 

     注:第一次洗脫通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脫有利于回收剩下 20%的 DNA。