瓊脂糖凝膠 CL-4B 是用 4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質(zhì)使用。

1 貯存 

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在 4℃~25℃（保存溶液為 20%乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過(guò) 的柱子貯存在 4℃（20%乙醇），保質(zhì)期：2 年。 

2 應(yīng)用 

本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，具有非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，用于分子量差異大、對(duì)分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。 

2.1 裝柱 

（1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實(shí)驗(yàn)的溫度。配制緩沖液，對(duì)所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。 

（2）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

（3）根據(jù)需要量取相應(yīng)量的凝膠，用去離子水清洗掉 20%乙醇。 

（4）將柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。 

（5）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（6）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過(guò)填料最大耐壓）。

2.2 平衡 

上樣前平衡層析柱至少 5-10 個(gè)柱體積，直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的 pH 值和電導(dǎo)值等于上柱 Buffer 的 pH 值和電導(dǎo)值）。 

2.3 上樣 

（1）樣品用平衡液配制，樣品一定要離心或過(guò)濾后上樣（0.45um 濾膜），如果樣品鹽濃度太大，則需要處理后再上樣。 

（2）推薦的上樣量不超過(guò)柱體積的 5%。

2.4 洗脫 

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

2.5 再生 

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。在一些應(yīng)用中，諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)體物質(zhì)在再生過(guò)程中洗脫不掉。出現(xiàn)下面這些情況，是必須需要清洗再生的： 

（1）背壓增加； 

（2）色譜柱頂部的顏色變化； 

（3）分辨率降低； 

（4）轉(zhuǎn)換接頭和凝膠表面之間出現(xiàn)空隙。 

如果觀察到壓力增大，在開(kāi)始柱清潔程序之前先檢查管路中的各個(gè)過(guò)濾閥、過(guò)濾膜是否被污染，然后通過(guò)用 0.1M NaOH 洗滌柱子，除去沉淀的蛋白質(zhì)，非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。

3 注意事項(xiàng) 

（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過(guò)濾器過(guò)濾。 

（2）在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.1 摩爾。堿會(huì)使流速變慢。 

（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。