1 理化指標

                                                                          *HR 10/10 層析柱，5 cm 柱床高度

2 使用方法 

2.1 填料的準備 

     將干粉浸泡于純水或緩沖液中，液體可以適當多加一些，室溫下完全溶脹需 1-2 天，或者用 100℃純水浸泡大約半個小時。完全溶脹后除去上清液以及上層少許漂浮物，用緩沖液徹底清洗填料。

2.2 裝柱 

     （1）所有實驗材料均需平衡至色譜層析操作的溫度，所有的緩沖液進行脫氣處理； 

     （2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。 

     （3）用去離子水清洗掉 20%乙醇保存液，用緩沖液配成勻漿。 

     （4）將柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無氣泡。 

     （5）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。 

     （6）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

2.3 平衡柱子 

     用上樣的平衡緩沖液平衡柱子后即可上樣。（當流出液的 pH 和電導(dǎo)值與起始緩沖液相同時層析柱即完全平衡）。

2.4 上樣

     樣品應(yīng)溶解在起始平衡緩沖液中，或者通過透析或脫鹽的方法進行緩沖液置換，將樣品緩沖液轉(zhuǎn)移至起始平衡緩沖液。樣品的粘度不應(yīng)超過平衡緩沖液，上樣前必須使用 0.45um 微孔濾膜對樣品進行過濾。 

     最常見的程序是讓目標分子結(jié)合到離子交換柱上，其他雜質(zhì)流出。然而，在一些情況下，離子交換柱結(jié)合雜質(zhì)而使目標分子流出，這樣的操作也是可以的。

     對于目標分子的吸附，選擇具有適當 pH 的緩沖液是至關(guān)重要的，請參考下表。

     緩沖液的離子強度應(yīng)保持較低，以免干擾樣品結(jié)合，推薦的操作 pH 應(yīng)在緩沖液 pKa 的 0.5 個單位內(nèi)， 并且和目標分子的等電點（pI）相差至少一個 pH 單位。

                                                         Buffers for anion exchange chromatography

2.5 洗脫

     對于 DEAE 葡聚糖凝膠和 QAE 葡聚糖凝膠填料，一般使用鹽濃度遞增或 pH 值遞減（線性或者階梯梯 度）的方式來進行洗脫。 

2.6 再生 

     根據(jù)樣品的性質(zhì)，通常通過用高離子強度洗脫緩沖液，如 2M NaCl 對柱子進行洗滌，或降低緩沖液pH，然后在平衡緩沖液中重新平衡來進行再生。在一些應(yīng)用中，諸如變性蛋白質(zhì)或脂質(zhì)的物質(zhì)在再生過 程中洗脫不下來，則需要通過在位清洗程序 CIP 來清除。

2.7 在位清洗（CIP） 

     通過用 5 倍柱床體積的 2M NaCl 溶液來除去結(jié)合的蛋白質(zhì)。 

     通過用 2 倍柱床體積的 0.1M NaOH 溶液清洗填料，隨后立即用大量純水徹底清洗直至中性，從而除去沉淀的蛋白質(zhì)、疏水結(jié)合的蛋白質(zhì)和脂蛋白。 

3 保存 未使用的填料，請室溫密閉保存.使用完的填料，用純水徹底沖洗，用然后保存在 20%乙醇中，4℃保存，不能冷凍。 

4 注意事項 

     （1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會被吸附到填料上，影響填料的 正常使用。所有的緩沖液均需要用 0.45um 的過濾器過濾。 

     （2）在使用過程中，避免使用高濃度的強酸強堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于 0.1 摩爾。堿會使流速變慢。 

     （3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻進行。 

     （4）離子交換介質(zhì)在選擇層析柱時，避免使用細長柱，會增加實驗操作壓力。

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