應(yīng)用范圍：細(xì)胞膜熒光染料，主要用于細(xì)胞成像，細(xì)胞示蹤和追蹤

產(chǎn)品參數(shù) 

外觀：可溶于 DMSO 的紅色固體 

λEx/λ Em(MeOH) =491/613 nm 

CAS 號(hào)：114041-00-8 

分子式：C46H79IN2 

分子量：787 

分子結(jié)構(gòu)圖：

貯存條件 4℃ 避光保存，保質(zhì)期 12 個(gè)月。

產(chǎn)品介紹 

DiA 是一種細(xì)胞膜綠色熒光染料，它在細(xì)胞膜中的擴(kuò)散速度比 DiO 快，并且經(jīng)常和 DiI 一起使用于細(xì)胞膜雙色標(biāo)記。

DiA 染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過(guò)程。此外，在固定透化（室溫下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。DiA 對(duì)固定細(xì)胞的染色效果比 DiO 好。

使用方法 

1. 染色液制備

（1）配置無(wú)水 DMSO、無(wú)水 DMF 或 EtOH 儲(chǔ)存液：儲(chǔ)存液用無(wú)水 DMSO、無(wú)水 DMF 或 EtOH 配置濃度 1～5 mM。 DiO在DMSO和DMF中的溶解度比在EtOH中的溶解度高。

注：①未使用的儲(chǔ)存液分裝儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。②發(fā)現(xiàn)較難溶解時(shí)可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS 或 PBS）稀釋儲(chǔ)存液，配制濃度為 1～30 μM 的工作液。最常用的工作液濃度為 5-10 μM。

注：工作液最終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度的 10 倍范圍內(nèi)開始最優(yōu)濃度的摸索。

2. 懸浮細(xì)胞染色 

（1）加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為 1 ×106/mL。 

（2）37℃ 孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以 20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。 

（3）孵育結(jié)束，1000～1500 rpm 離心 5 min。傾倒上清液，再次緩慢加入 37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。 

（4）重復(fù)步驟（3）兩次以上。

3. 貼壁細(xì)胞的染色

（1）將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。 

（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，但表面要保持濕潤(rùn)。 

（3）在蓋玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。 

（4）37℃ 孵育細(xì)胞 2～20 min，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?20 min 作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。 

（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片 2～3 次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育 5～10 min，然后吸干培養(yǎng)基，但要使表面保持濕潤(rùn)。

4. 結(jié)果檢測(cè)樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè)，可以通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。

注意事項(xiàng) 

1. DiA 染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí)，樣品宜使用配制在 PBS 中的 4% 多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。 

2. 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。